引言

上個(gè)月在嘉興的藥物安評毒理年會(huì)上， 齊氏生物團(tuán)隊(duì)和多位老師聊到#TA102菌株#，大家一致反映TA102在Ames試驗(yàn)中表現(xiàn)出的“不敏感"，即回復(fù)突變率“較低"甚至個(gè)別試驗(yàn)沒有突變。針對這個(gè)問題，今天從遺傳構(gòu)造和檢測原理角度淺談一下，揭示其背后的“清潔工"機(jī)制，并提供相關(guān)解決思路，希望給同行老師們提供一些參考。

在Ames試驗(yàn)中觀察到TA102菌株的自發(fā)回變菌落數(shù)（即突變率）相對“較低"，其實(shí)是一個(gè)常見的現(xiàn)象。這并非意味著TA102不敏感，而是由其獨(dú)特的遺傳構(gòu)造和檢測原理決定的。

一、遺傳構(gòu)造

上表所示，相較TA97、TA98、TA100等常見菌株（它們都缺失uvrB基因），TA102擁有完整的DNA切除修復(fù)系統(tǒng)（即uvrB基因完整）和攜帶 pAQ1質(zhì)粒，形成了根本區(qū)別。尤其攜帶了pAQ1質(zhì)粒，這個(gè)質(zhì)粒為其帶來了四環(huán)素抗性（這是鑒定TA102菌株的重要特征之一），這為它帶來了獨(dú)特的檢測譜和一定的額外修復(fù)能力，使其在面對紫外線等特定損傷時(shí)，比其他uvrB缺陷的菌株更為“堅(jiān)韌"。

二、獨(dú)特"技能“

總結(jié)：TA102菌株擁有完整的uvrB基因和功能齊全的核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)，能高效修復(fù)自發(fā)損傷，因此在Ames試驗(yàn)中表現(xiàn)出相對較低的自發(fā)突變率 。 

三、“突變率低"怎么解讀？

1. 正常情況

·“低"是正常的

在TA102菌株的Ames試驗(yàn)中，觀察到較低的自發(fā)回變菌落數(shù)是正常且符合預(yù)期的。每個(gè)菌株都有其特定的歷史對照值范圍（例如，TA102的自發(fā)回變數(shù)可能通常在約200-400個(gè)菌落/平板，而TA100可能在約100-200個(gè)菌落/平板）。判斷結(jié)果時(shí)，必須將處理組的回變菌落數(shù)與該實(shí)驗(yàn)室自己建立的TA102陰性對照本底值進(jìn)行比較，而不是與其他菌株的絕對值或感覺進(jìn)行比較。

· 敏感性≠高本底

TA102對特定誘變劑（如交聯(lián)劑）的高敏感性，體現(xiàn)在加入誘變劑后，其回變菌落數(shù)相對于其自身的低本底值有極大幅度的增加（例如，增加3倍甚至10倍以上）。它敏銳地檢測到損傷，并在修復(fù)系統(tǒng)“失守"后表現(xiàn)出突變。而高本底的菌株，其起點(diǎn)高，增加的倍數(shù)可能不那么驚人，但同樣具有意義。

2.異常情況

如果你觀察到TA102的突變率低于該菌株的正常歷史范圍，甚至幾乎沒有回變菌落，那么可能意味著菌株或?qū)嶒?yàn)操作出現(xiàn)如下問題：

四、如何提高"突變率“

在Ames試驗(yàn)中，提高TA102菌株的突變敏感性，關(guān)鍵在于優(yōu)化試驗(yàn)條件、確保菌株特性并合理使用代謝活化系統(tǒng)(見：S9代謝活化系統(tǒng)應(yīng)用指南）。

綜上，希望這些具體的策略能幫助您在Ames試驗(yàn)中更有效地使用TA102菌株。如果你在實(shí)驗(yàn)過程中遇到其他特定問題，或者想了解更多關(guān)于陽性對照物選擇的細(xì)節(jié)，歡迎隨時(shí)提出！