一、常見誤區(qū)
忽視對(duì)照設(shè)置:未設(shè)置陰性對(duì)照(如空白樣本)或陽(yáng)性對(duì)照(已知陽(yáng)性樣本),導(dǎo)致無(wú)法判斷背景信號(hào)或試劑盒靈敏度,易將非特異性信號(hào)誤判為陽(yáng)性。
樣本處理不當(dāng):細(xì)胞裂解不充分、固定時(shí)間過長(zhǎng)或未洗滌,可能殘留雜質(zhì)或干擾物質(zhì),影響檢測(cè)信號(hào)準(zhǔn)確性(如熒光背景升高)。
結(jié)果判讀主觀化:依賴肉眼觀察顏色變化或熒光強(qiáng)度,未使用標(biāo)準(zhǔn)比色卡或定量分析工具(如酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀),導(dǎo)致結(jié)果重復(fù)性差。
忽略臨界值范圍:將弱陽(yáng)性結(jié)果直接判定為陰性或陽(yáng)性,未結(jié)合試劑盒提供的臨界值(Cut-off值)或參考范圍,增加假陽(yáng)性/假陰性風(fēng)險(xiǎn)。
交叉反應(yīng)干擾:樣本中存在與目標(biāo)抗原結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)(如其他細(xì)胞因子或同源蛋白),未通過特異性驗(yàn)證試驗(yàn)(如Westernblot)排除非特異性結(jié)合。
二、正確分析方法
嚴(yán)格對(duì)照實(shí)驗(yàn):每批次檢測(cè)需包含陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及空白對(duì)照,確保試劑盒性能穩(wěn)定且無(wú)污染。
標(biāo)準(zhǔn)化樣本處理:遵循試劑盒說明書優(yōu)化裂解、固定、洗滌步驟,例如使用預(yù)冷緩沖液、控制離心速度與時(shí)間,減少操作變異。
定量結(jié)果分析:采用酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀或qPCR等定量設(shè)備讀取信號(hào),結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線或熒光閾值(Ct值)計(jì)算目標(biāo)物質(zhì)濃度,避免主觀判讀誤差。
綜合臨界值判斷:根據(jù)試劑盒提供的臨界值范圍(如OD值≥0.2為陽(yáng)性),結(jié)合樣本重復(fù)檢測(cè)結(jié)果(如3次平行試驗(yàn))綜合判定,弱陽(yáng)性樣本需進(jìn)一步驗(yàn)證。
交叉反應(yīng)驗(yàn)證:對(duì)可疑結(jié)果進(jìn)行特異性驗(yàn)證,如通過免疫沉淀、基因編輯敲除目標(biāo)蛋白等方法確認(rèn)信號(hào)來源,排除非特異性干擾。
通過規(guī)范操作流程、結(jié)合定量分析與對(duì)照實(shí)驗(yàn),可顯著提升細(xì)胞檢測(cè)試劑盒結(jié)果的準(zhǔn)確性,為科研與臨床診斷提供可靠依據(jù)。